细胞培养在实验完成后需要将细胞冻存存放起来，以便以后实验需要，可以将冻存的细胞直接复苏使用。然而为了使复苏得到的细胞状态好，可直接用于实验，细胞在冻存时的状态就显得尤为重要，一定要选择细胞培养状态好的时候将细胞冻存起来，其次是冻存细胞的方式和条件，冻存液的选择等对细胞冻存都很重要。
细胞培养在实验完成后需要将细胞冻存存放起来，以便以后实验需要，可以将冻存的细胞直接复苏使用。然而为了使复苏得到的细胞状态好，可直接用于实验，细胞在冻存时的状态就显得尤为重要，一定要选择细胞培养状态好的时候将细胞冻存起来，其次是冻存细胞的方式和条件，冻存液的选择等对细胞冻存都很重要。
下面简单介绍一下细胞冻存方面的知识
一、什么是细胞冻存？
细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存。
二、细胞冻存的具体操作步骤
1、配制含10%DMSO、90%胎牛血清的冻存液或市面上购买的冻存液。
2、从培养箱取出细胞培养瓶（一般选择处于对数期的细胞），转移到超净台。弃去原有培养液，用1-2mL PBS缓冲液洗涤1次（注意从侧壁加入，以免冲掉细胞），弃去PBS缓冲液。
3、向培养瓶中加入1mL胰酶，消化，将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜下观察细胞消化情况，当细胞变圆且大量脱落时，转移到超净台。
4、加入2mL完全培养基，终止消化。用移液器充分缓慢吹打，使细胞能够完全脱落。然后将细胞悬液转移至15mL离心管中，1000rpm/min离心5分钟，转移进超净台，打开盖子，弃去上清。
5、加入适量冻存液，用移液器轻轻吹打细胞团块，制备成细胞悬液，调节冻存液中细胞密度，根据经验按照T25培养瓶一瓶冻存2-3管，将细胞分装入冻存管中，每管1-1.5 ml。
6、在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者。
7、将装有细胞的冻存管放入4℃冰箱30min，后-20℃冰箱30min，然后放入-80℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。或按照冻存液说明书操作。
注意事项
1.使用DMSO前，不需要进行高压灭菌，它本身就有灭菌的作用。高压灭菌反而会破坏它的分子结构，以至于降低冷冻保护效果。在常温下，DMSO对人体有害，故在配制时最好戴上手套操作。
2.细胞冻存注意要慢冻，按照温度梯度降温法进行，不宜将冻存细胞放置在0℃～-60℃这一温度范围内过久，低温损伤主要发生在这一温度区内，是“危险温区”，实验操作中可将细胞冻存管装在程序降温盒中再放入-80℃冰箱，使之以约1℃/min的降温速度渡过“危险温区”后保留在低温冰箱或转移至液氮罐。
3.注意定期检查液氮罐内液氮量，及时添加。
